小鼠心肌成纖維細胞的組織來源于實驗動物的正常心臟組織，心臟是脊椎動物身體中最重要的一個器官，主要功能是提供壓力，把血液運行至身體各個部分。心臟的作用是推動血液流動，向器官、組織提供充足的血流量，以供應氧和各種營養物質，并帶走代謝的終產物（如二氧化碳、無機鹽、尿素和尿酸等），使細胞維持正常的代謝和功能。
心臟中，心肌成纖維細胞約占正常心肌組織細胞總數的60%-70%，是心臟中非心肌細胞的主要組成部分，廣泛存在于心臟組織中，包圍心肌細胞，連接心肌細胞間質，與缺血性心臟病、炎癥、肥大、梗死等病理狀態密切相關。細胞生長方式以長梭狀細胞，貼壁培養。
小(xiao)鼠心肌(ji)成纖(xian)維細胞的方法有很多，賽百慷提供的心肌成纖維細胞分離方法有兩種，一種是貼塊法，一種是消化法，這兩種方法都可以用于分離和培養原代細胞。
實驗器械：
1.培養皿
2.T-25細胞培養瓶
3.100目不銹鋼網篩
4.200目不銹鋼網篩
5.眼科剪
6.眼科鑷
7.離心管（15ml、50ml）
實驗分離和培養步驟：
1. 小(xiao)鼠頸(jing)椎脫(tuo)臼處死后(hou)，剃(ti)除腹胸部的被毛，放入裝有(you)75%酒精的燒杯中浸泡5min。
2. 取出(chu)小(xiao)鼠，在無菌(jun)環境下(xia)打開胸腔(qiang)，取出(chu)心臟組織，注入盛有無菌(jun)1×PBS的培養(yang)皿中，洗凈組織表面的血液(ye)。
3. 將清洗干凈的(de)(de)心臟(zang)組織轉入(ru)裝有75%酒精的(de)(de)培養皿中浸泡(pao)15s以殺死大多(duo)數的(de)(de)心臟(zang)被膜細胞，浸泡(pao)完(wan)成后立即轉入(ru)裝有無菌1×PBS的(de)(de)培養皿中震蕩清洗。
4. 清洗完成后，用剪刀鑷子(zi)配合(he)除(chu)(chu)去(qu)(qu)主動脈弓和心(xin)房組織(zhi)，僅保留心(xin)室部分，再次用1×PBS清洗去(qu)(qu)除(chu)(chu)心(xin)室內的血液。
5. 將清洗干(gan)凈的心室組織用剪刀(dao)減成1mm3大小(xiao)左右的碎塊，之后用PBS清洗若干(gan)次后按下述兩種方法之一進行后續操作(zuo)。
A.貼塊法
6. 將清洗好的碎塊轉入(ru)另一培(pei)養皿中，用(yong)0.25%胰蛋白酶(mei)消化(hua)液浸泡(pao)組織，室溫消化(hua)3-5min。
7. 消化(hua)(hua)完成后(hou)，添加數毫升FBS終止消化(hua)(hua)，之(zhi)后(hou)吸(xi)棄液體，加PBS清洗組(zu)織塊(kuai)1伺(si)次后(hou)，用200ul吸(xi)頭將組(zu)織塊(kuai)平均接(jie)種于T-25培養瓶的培養面上，之(zhi)后(hou)將培養瓶放置于37℃二氧(yang)化(hua)(hua)碳培養箱中，靜置2-4h。
8. 待(dai)組織處于略微脫水的狀態時(shi)，小心(xin)添加(jia)2ml完全(quan)培(pei)養基，添加(jia)時(shi)注意盡量不要(yao)將(jiang)組織塊(kuai)沖起，要(yao)使培(pei)養基接觸所有的組織塊(kuai)。
9. 之后(hou)放入培(pei)養箱中繼(ji)續培(pei)養，一般2-4天后(hou)成纖維細(xi)胞會從組織塊(kuai)(kuai)周圍爬出，待爬出的細(xi)胞有較多數量時，可將細(xi)胞消化下來(lai)，去除組織塊(kuai)(kuai)，轉入另一培(pei)養瓶中培(pei)養。
B.消(xiao)化法(fa)
6. 將(jiang)清洗好的碎塊轉入另一離心(xin)管中，加入混合消化液(ye)（0.08%胰酶(mei)+0.06%Ⅱ型膠原(yuan)酶(mei)）37℃水浴(yu)消化8min后，吸取上層混懸液(ye)棄(qi)去。
7. 余(yu)下組織加(jia)入混(hun)合消(xiao)化(hua)液(ye)(ye)10ml，37℃水浴(yu)震(zhen)蕩消(xiao)化(hua)10min；吸取上層懸液(ye)(ye)至另一離心管(guan)中(zhong)，加(jia)入適量FBS終止反(fan)應；剩余(yu)沉淀物再加(jia)消(xiao)化(hua)液(ye)(ye)消(xiao)化(hua)3-5次，直至組織塊完全消(xiao)化(hua)。
8. 按1∶1加入含血清的(de)培養(yang)基，中(zhong)止酶反應(ying)，懸液(ye)過150目網篩去(qu)除較大的(de)組織塊。
9. 收集全部中止后的消化液于離心管中，300g，離心10 min，棄(qi)去上清(qing)，加入培養液重懸細胞后計活細胞數(shu)。
10. 調整(zheng)細胞密(mi)度以(yi)1× 106個/ml 接種(zhong)入(ru)的T-25培養(yang)瓶中(zhong)，每瓶添加2ml細胞懸液。
11. 培養瓶放置于37℃，5% CO2培養箱中靜置40min后(hou)，吸棄上(shang)清液以去除(chu)未貼壁的(de)非(fei)成(cheng)纖(xian)維(wei)細胞和死細胞，再添加5ml完全培養基(ji)繼續(xu)培養。
