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盡管 Culture-Inserts 插件中的材料可高壓滅菌并且與酒精相容，但我們不建議重復使用。如果您仍想嘗試重復使用，則需要建立一個用酸或堿的清潔程序。ibidi沒有任何清潔Culture-Inserts插件的經驗，雖然它們可能會保持粘性，但之前實驗的殘留可能會影響重現性。 

2、可否在蓋玻片上使用 Culture-Inserts插件嗎？

可(ke)以(yi)，您可(ke)以(yi)在任(ren)何(he)蓋玻片上使(shi)用(yong) Culture-Inserts插件。到目前為止(zhi)，還沒(mei)被報告與任(ren)何(he)干燥表面不相容。 

3、是否可以使用 Culture-Insert 插件制作小于 500 μm 的傷口？

不可以，Culture-Inserts 插件中最小和標準的傷口尺寸是 500 μm。Culture-Insert 4 Well 4孔插件會有一個額外的中心間隙，傷口大小為 1000 μm。

4、Culture-Insert 插件是如何固定在培養皿上的？

Culture-Insert 插(cha)件(jian)由生物相容的(de)硅膠材(cai)料(liao)制(zhi)成。硅膠底部(bu)有一(yi)個粘性表(biao)面(mian)(mian)，可粘附(fu)（粘）在任何平坦、干燥、均(jun)勻的(de)表(biao)面(mian)(mian)。這(zhe)種材(cai)料(liao)足夠柔(rou)軟可粘到表(biao)面(mian)(mian)上。您可以用無(wu)菌鑷(nie)子按壓插(cha)件(jian)來簡單地修(xiu)復它。

 5、您是否曾經遇到過 Culture-Inserts 插件無法粘附在定制涂層表面上的問題？

只要表(biao)(biao)面(mian)(mian)干(gan)燥，我們從未(wei)遇到(dao)過(guo)讓 Culture-Inserts 插件粘附在定制(zhi)涂層表(biao)(biao)面(mian)(mian)上(shang)的任何(he)問題(ti)。但是(shi)，潮濕的表(biao)(biao)面(mian)(mian)會(hui)導致泄漏。因此，請確保您(nin)的定制(zhi)涂層表(biao)(biao)面(mian)(mian)完全干(gan)燥。

6、需要在 Culture-Insert 插件中播種多少個細胞才能進行細胞遷移實驗？

開始遷移(yi)實(shi)驗時，Culture-Insert 插件中(zhong)的(de)(de)細(xi)胞層應融合(he)。在(zai)所(suo)有實(shi)驗中(zhong)，匯合(he)細(xi)胞層的(de)(de)密度應盡可能一致。使用的(de)(de)接種細(xi)胞數量取決于您的(de)(de)細(xi)胞類型，因此(ci)您可以在(zai) Culture-Insert 2 Well 說(shuo)明書中(zhong)找(zhao)到(dao)推薦的(de)(de)范圍和詳細(xi)方案。 

7、為什么移除 ibidi Culture-Insert 插件后細胞有時會從蓋玻片上脫落？

以下(xia)是解(jie)釋細胞脫(tuo)離的一些可能原(yuan)因(yin)：

? 細(xi)胞密度(du)太高。--> 播種更少的細(xi)胞（細(xi)胞層應在 24 小時后生長(chang)至 100% 融合，但不能過度(du)生長(chang)）。有關(guan)傷口愈(yu)合試驗的詳細(xi)方(fang)案，請參閱(yue)：

? 細胞(bao)正在(zai)挨餓。--> 增(zeng)加每個(ge)插入孔的培養基(ji)體積，或在(zai)細胞(bao)生長期(qi)間(jian)更換培養基(ji)。

? 在(zai)極(ji)少數情況下，細(xi)胞(bao)類型不能很(hen)好地粘附在(zai) ibiTreat 表面。--> 首先，覆蓋(gai)(gai)蓋(gai)(gai)玻片表面以(yi)促(cu)進細(xi)胞(bao)附著。然后，在(zai)插(cha)入 ibidi Culture-Insert 插(cha)件(jian)之前讓(rang)涂層干燥。

以下是使用帶有涂層(ceng)的 ibidi Culture-Inserts 插(cha)件以促進細胞粘(zhan)附的一些額外提(ti)示(shi)：

? 我們強(qiang)(qiang)烈建議提前測(ce)試移(yi)除ibidi Culture-Insert 插件是否會破壞(huai)遷(qian)移(yi)間隙(xi)(xi)中的涂層(ceng)。這(zhe)可(ke)以通(tong)過(guo)(guo)使用(yong)針對涂層(ceng)蛋白(bai)的熒(ying)光標記抗體進(jin)(jin)行分析。如(ru)果遷(qian)移(yi)間隙(xi)(xi)區域中涂層(ceng)的熒(ying)光信號與開放孔中的一樣(yang)均勻和(he)強(qiang)(qiang)烈，則可(ke)以假(jia)設在插入物移(yi)除后是保(bao)持完好的。經過(guo)(guo)幾次成功的測(ce)試后進(jin)(jin)行實際實驗通(tong)常是安(an)全(quan)的。

? 如果去(qu)除插入物(wu)破壞了大(da)部分涂(tu)(tu)層(ceng)，則僅涂(tu)(tu)覆插件的孔，然后接種細胞。取(qu)出插件后，通過向培養基中(zhong)添加(jia)低濃度涂(tu)(tu)層(ceng)來填充間(jian)隙并(bing)孵育約 30 分鐘。之后，用普通介質替換涂(tu)(tu)層(ceng)溶液并(bing)繼續進行遷移實驗(yan)。

8、當 Culture-Insert變干燥時，包被蛋白會失去活性嗎？

這主(zhu)要取決于(yu)與(yu) Culture-Insert 插(cha)件一起使(shi)用(yong)的(de)蛋(dan)白(bai)質類型。使(shi)用(yong)層粘連蛋(dan)白(bai)的(de)人(ren)通常更喜歡在(zai)涂層和(he)細胞接(jie)種之(zhi)間保持水分(fen)。根據(ju)我(wo)們的(de)經驗，當纖(xian)連蛋(dan)白(bai)和(he)膠原蛋(dan)白(bai) IV 干燥時，我(wo)們沒有發現對細胞遷移速度有任(ren)何影(ying)響。 

9、有沒有辦法用懸液細胞進行傷口愈合實驗，或者該實驗僅適用于貼壁細胞？

目前，使用(yong) Culture-Insert插(cha)件的(de)傷口愈(yu)合實驗只能(neng)用(yong)于貼(tie)壁細(xi)胞。然(ran)而，單個(ge)細(xi)胞的(de)遷移研究可以在 μ-Slide 趨(qu)化性(xing)中通過(guo)將細(xi)胞嵌入到(dao)3D基質（例(li)如，I 型膠原蛋白凝(ning)膠）中進行。 

10、是什么使 Culture-Inserts插件在細胞接種過程中不會泄漏？

Culture-Insert 插件由硅膠(jiao)材料制成。上(shang)部(bu)是粗料，下部(bu)是非常柔軟(ruan)的材料，在(zai)按下 Culture-Insert 插件后會(hui)固定在(zai)表面上(shang)。正確插入時是不(bu)會(hui)有(you)任何泄漏的。 

11、該如何存儲 Culture-Inserts插件？

請在室溫下儲(chu)存 Culture-Inserts。打開過的產品應(ying)儲(chu)存在無菌容器中。 

12、有時很難在 Culture-Insert 插件中看到細胞層的匯合。您有什么建議？

當(dang)使(shi)用相差顯微鏡和小孔(kong)時，例如 Culture-Insert 插件或 96 孔(kong)板，空氣-水界面之間的彎(wan)月面會導致表面強(qiang)烈彎(wan)曲。這會破壞除孔(kong)中心(xin)以外(wai)的任(ren)何(he)地方的相位(wei)對(dui)比效(xiao)應。

一種(zhong)解決方案是用細胞(bao)培養基完全均勻地填充 Culture-Insert 的兩個(ge)孔。通過這樣做(zuo)，您可以在(zai)孔上方的介質和(he)空氣之間(jian)創建一個(ge)平(ping)面。請記住，這可能會導致(zhi)兩孔之間(jian)的交叉(cha)污染(ran)。

13、有時，細胞傾向于聚集在 ibidi Culture-Insert插件的邊緣。怎樣才能避免這種情況？

當(dang)細(xi)胞(bao)(bao)在 Culture-Insert插件中(zhong)生長到非常高(gao)的密度時(shi)(shi)，會觀察(cha)到了這(zhe)種(zhong)情(qing)(qing)況(kuang)。為(wei)了減少(shao)(shao)細(xi)胞(bao)(bao)團塊，您應該在實驗開(kai)始(shi)時(shi)(shi)使用較(jiao)低(di)的細(xi)胞(bao)(bao)密度。然(ran)而，有時(shi)(shi)細(xi)胞(bao)(bao)會粘在與細(xi)胞(bao)(bao)相(xiang)容的硅膠上(shang)。在這(zhe)種(zhong)情(qing)(qing)況(kuang)下，我們建議較(jiao)少(shao)(shao)孵育時(shi)(shi)間和/或(huo)細(xi)胞(bao)(bao)數量。 

14、Culture-Insert 如何在不造成細胞損傷的情況下模擬生理傷口？

使用(yong)體外(wai)實(shi)驗時(shi)，很難以可重(zhong)(zhong)復(fu)的(de)方式(shi)模擬生理傷(shang)(shang)口(kou)。當然(ran)，來自死細胞的(de)碎片(pian)可能在與傷(shang)(shang)口(kou)愈合(he)(he)相關的(de)遷移(yi)中發揮(hui)作用(yong)。使用(yong) Culture-Insert插(cha)件的(de) ibidi 傷(shang)(shang)口(kou)愈合(he)(he)實(shi)驗提供了可重(zhong)(zhong)復(fu)的(de)、無損(sun)傷(shang)(shang)的(de)細胞貼片(pian)。

在(zai)體內(nei)，各種其他(ta)參數對傷口(kou)愈(yu)合(he)的(de)影響更大，例(li)如不同細胞(bao)類型(xing)的(de)相互作用。使用 Culture-Insert插(cha)件的(de)體外 ibidi 傷口(kou)愈(yu)合(he)實(shi)驗將遷移(yi)速度與所(suo)有這些其他(ta)影響分(fen)開，提供(gong)了一(yi)個(ge)客觀且可重復的(de)實(shi)驗環境。

15、用Culture-Insert插件產生間隙時細胞是否會受損？

Culture-Insert 插件將(jiang)細(xi)胞(bao)彼此分(fen)離，而不(bu)會(hui)產生傳統意義上的(de)傷口（例如，在劃痕實(shi)驗(yan)期間(jian)）。目的(de)是在不(bu)產生大量受傷細(xi)胞(bao)的(de)情況下產生間(jian)隙(xi)，然后研究(jiu)間(jian)隙(xi)閉合。該技術使用戶能夠將(jiang)細(xi)胞(bao)的(de)遷移行為與細(xi)胞(bao)損傷區分(fen)開來。 

16、 Culture-Inserts 插件能否用于蛋白質涂層表面？拔出 Culture-Insert 插件會干擾涂層嗎？

一般來說(shuo)，只要涂層干燥，Culture-Insert 產檢(jian)可以放置(zhi)在涂層表(biao)面(mian)上。請注意，插件不會黏附在潮濕的表(biao)面(mian)上。

但是(shi)(shi)，我們強烈建議您(nin)(nin)提前測試插(cha)件移除(chu)是(shi)(shi)否會破壞遷移間隙(xi)中的(de)(de)涂層。您(nin)(nin)可以使(shi)用針對涂層蛋白的(de)(de)熒(ying)光(guang)標(biao)記抗體(ti)來分析(xi)這一(yi)點。如果遷移間隙(xi)區域(yu)的(de)(de)涂層發出(chu)的(de)(de)熒(ying)光(guang)信號(hao)與(yu)開放孔(kong)中的(de)(de)一(yi)樣(yang)均勻和強烈，那么您(nin)(nin)可以假(jia)設(she)在移除(chu)插(cha)件后涂層是(shi)(shi)保持完好的(de)(de)。經過(guo)幾次(ci)成功的(de)(de)測試后進(jin)行(xing)實(shi)(shi)際實(shi)(shi)驗通常是(shi)(shi)安全的(de)(de)。