超濾(lv)是大分子脫鹽、濃縮最方便的方法，重復性好，已經在蛋白、抗體、病毒、外泌體、核酸、囊泡等樣品制備中建立標準操作。
默(mo)克(ke)生命科學旗下品牌Millipore的采用離心方式快速處理樣品，是很多科研小伙伴們每天要用到的基本裝備。但是，在默克生命科學團隊推出超濾管中文說明書（、、）之前，我們發現近90%的使用者在選擇和使用過程中因為缺乏必要信息而沒有獲得最佳體驗，更重要的是，寶貴的樣本會遭受本可避免的損失
如果目的(de)(de)(de)蛋白是120kDa，請問應(ying)該選擇的(de)(de)(de)超(chao)(chao)濾(lv)管規(gui)格(ge)是100k、50k，還是30k甚(shen)至10k？你采用1/2、1/3抑或1/6算法？這(zhe)些沒有(you)統(tong)一的(de)(de)(de)說法，是因為(wei)不同廠家對膜的(de)(de)(de)截(jie)留分子量的(de)(de)(de)定義不同。Millipore超(chao)(chao)濾(lv)管采用其特有(you)的(de)(de)(de)再(zai)生(sheng)纖維素膜，定義為(wei)：一個(ge)確(que)定NMWL 的(de)(de)(de)超(chao)(chao)濾(lv)膜應(ying)該截(jie)留至少(shao)90% 以上(shang)的(de)(de)(de)這(zhe)個(ge)大小(xiao)的(de)(de)(de)球形分子，即100kDa的(de)(de)(de)球形蛋白用100k的(de)(de)(de)Ultracel再(zai)生(sheng)纖維素膜得率超(chao)(chao)過90%。請仔細(xi)查看以下Millipore官方(fang)數(shu)據：
截(jie)留分(fen)(fen)子量選(xuan)小啦！看(kan)到(dao)這個表，你是否發現原來(lai)抱怨Millipore超濾管流速偏慢的(de)根源來(lai)自對Millipore截(jie)留分(fen)(fen)子量定義(yi)的(de)誤解？膜(mo)孔徑要小于目的(de)分(fen)(fen)子。因為樣(yang)品分(fen)(fen)子形狀不同，為了最大化樣(yang)品的(de)回收，對于沒有參考的(de)樣(yang)品，可以初步選(xuan)擇截(jie)留分(fen)(fen)子量約(yue)為目的(de)分(fen)(fen)子分(fen)(fen)子量1/2的(de)膜(mo)。
? 倒轉離心，最大化回收率
收取體積已經(jing)很(hen)小的濃縮好的樣品時，你(ni)會：
? 購買最尖細的槍頭，把樣品吸回來
? 濃縮倍數低一點，以便用槍頭把樣品吸回來
? 反轉離心回收，獲得最高得率
最后(hou)一個(ge)，你答對了么？
Millipore Amicon Ultra系列(lie)超濾(lv)管(guan)上樣體(ti)積有(you)0.5/2/4/15/70mL等五種，除了(le)(le)采用(yong)低吸附的(de)管(guan)材和最低蛋白吸附的(de)再生纖維素(su)超濾(lv)膜，其(qi)中0.5mL、2mL和70mL的(de)規格還(huan)特別設計(ji)了(le)(le)反轉回收模式，以便(bian)使(shi)已經濃縮(suo)的(de)樣品(pin)最大化回收。現在你總該知(zhi)道為什么收到(dao)產品(pin)時會有(you)兩(liang)個(ge)外管(guan)了(le)(le)吧～
? 脫鹽濃縮，一個超濾管搞定
濃(nong)縮用超濾管，脫(tuo)鹽(yan)用透析袋或脫(tuo)鹽(yan)柱，這是很多實(shi)驗室(shi)一直沿(yan)用的實(shi)驗操(cao)(cao)作(zuo)。其實(shi)呢，超濾管做“脫(tuo)鹽(yan)+濃(nong)縮”，也是很多蛋白(bai)操(cao)(cao)作(zuo)高手(shou)的小訣竅。Millipore中文官(guan)方說明(ming)書特別給大家提示了這個方法——用更(geng)少(shao)的工具(ju)和更(geng)短的時間，減少(shao)轉移誤操(cao)(cao)作(zuo)和樣品(pin)損(sun)失，卻能(neng)獲得更(geng)好處(chu)理效果，你(ni)get了嗎(ma)？
Tips
大體積超濾請選用Amicon，可以滿(man)足1L以內的樣品(pin)濃縮脫(tuo)鹽。
透析請(qing)選用，溫和脫鹽換(huan)液，標準槍(qiang)頭(tou)操作。
