細胞名稱：H9
細胞(bao)描述：人胚胎干(gan)細(xi)胞(bao)，曾用名WA09
形(xing) 態：球形克隆，貼壁生長
來源性別：女性(xing)
組(zu)織：內細(xi)胞(bao)團
凍存日期(qi)/代數(shu)：詳見(jian) 凍存管/培養瓶 標識
建議復(fu)蘇培(pei)養體系：1 個(ge) T25 培(pei)養瓶或6cm培(pei)養皿(min)
細胞狀態：良好
支原體檢(jian)測結(jie)果(guo)：陰性
細胞用(yong)途：僅供科(ke)研使(shi)用。
STR鑒定結果：
D5S818 | 11 | 12 |
D13S317 | 9 | 9 |
D7S820 | 9 | 11 |
D16S539 | 12 | 13 |
VWA | 17 | 17 |
TH01 | 9.3 | 9.3 |
AMEL | X | X |
TPOX | 10 | 11 |
CSF1PO | 11 | 11 |
D12S391 | 15 | 19 |
FGA | 26 | 28 |
D2S1338 | 18 | 24 |
H9細(xi)胞完全培(pei)養基培(pei)養人胚(pei)胎(tai)干(gan)細(xi)胞
1.試劑和(he)材料(liao)
H9細(xi)胞完全(quan)培養基試劑(ji)盒
成分 | 規格(ge) | 數量 | 儲存(cun)條件 |
H9細胞基礎培養基 | 500mL | 1瓶 | 2-8℃ |
H9細胞培養基添加劑 | 20mL | 1支 | -20℃ |
所需的其它試(shi)劑(ji)和材料
產(chan)品 | 規格 | 貨號(hao) | 品牌 |
Y27632 | 1mg | H9Med-iCell-CA005 | iCell |
Matrix | 5mL | H9Med-iCell-CA004 | iCell |
H9細胞消化液 | 500mL | H9Med-iCell-CA003 | iCell |
另需細胞培(pei)養皿/瓶/板(ban)，15mL離(li)心(xin)管(guan)和移液管(guan)等(deng)細胞培(pei)養耗材 | |||
2.培(pei)養流程
2.1.復(fu)蘇
在開始復蘇前，將所有(you)試管、預(yu)熱后的(de)培養(yang)基(ji)和培養(yang)皿(min)準備好，已確保盡快完成復蘇過程。
1. 將凍(dong)存管從(cong)液氮(dan)中取(qu)出，快速在37℃水浴槽中解(jie)凍(dong)，輕柔持續地(di)搖動凍(dong)存管，直到只剩下一個小冷凍(dong)團。從(cong)水浴槽取(qu)出凍(dong)存管，70%乙醇擦拭進行(xing)消毒。
2. 使(shi)用移(yi)液管將凍存(cun)管中含有H9細胞的凍存(cun)液輕輕轉移(yi)至一個含有5-6mL已經(jing)預熱的完(wan)全培(pei)養基的15mL離心管中，過程必(bi)須輕柔防止吹散細胞團。
3. 室溫300g離(li)心(xin)5min。
4. 吸出培(pei)養基，確保細胞團完整(zheng)。
5. 然后(hou)緩慢(man)加入1mL完全培養(yang)基，用(yong)手指輕彈(dan)離心管底(di)(di)部，使細胞(bao)團脫(tuo)離底(di)(di)部并(bing)分散。
6. 輕輕的(de)(de)將(jiang)此1mL細胞懸液轉移(yi)至已包(bao)被(bei)的(de)(de)培(pei)養(yang)皿/板(ban)/瓶，根據最終培(pei)養(yang)細胞的(de)(de)液體體積，加入ROCK inhibitor Y27632，終濃度(du)為10μM。
7. 將培養(yang)皿/板/瓶置于37℃培養(yang)箱中(zhong)，每天更換(huan)培養(yang)基（換(huan)液不需要再添加Y27632，但培養(yang)基需提前預熱）。
2.2.傳(chuan)代(dai)
當(dang)集落變(bian)(bian)得(de)較(jiao)大、中心變(bian)(bian)得(de)密集、明亮（對比邊緣），相鄰(lin)的集落開始融合(he)時(shi)，此(ci)時(shi)可進行傳代(dai)。
1. 傳代(dai)前， 準備 37 ℃預熱好的好無鈣鎂 PBS 溶液(ye)及消化(hua)液(ye)，完全培養基(ji)。
2. 吸走上(shang)清，并加入 37℃預熱好的 PBS 溶(rong)液清洗1次(ci)。
3. 加入(ru)適量(liang)（按(an) 6 孔(kong)(kong)板每孔(kong)(kong)加 1ml，6cm 皿加 2ml，10cm 皿加 3ml 的量(liang)）的 37℃預熱好的消化液。
4. 37℃放置(zhi)1-2min，用(yong)手指輕彈皿/板/瓶身，顯微(wei)鏡(jing)下觀察到大部分克(ke)隆邊緣開(kai)始(shi)脫離培養(yang)皿/板底，克(ke)隆內部大部分細(xi)胞成團脫落。
5. 加入適(shi)量的完全培養基(ji)終止消化。
6. 移入(ru)離心管(guan)，300g離心5min，
7. 離心后重(zhong)懸(xuan)（重(zhong)懸(xuan)步(bu)驟參照復蘇4-5步(bu)）。
8. 傳(chuan)代比例為 1：6—1：8，根據最終培養(yang)細胞(bao)的液體體積(ji)，加入(ru)ROCK inhibitor Y27632，終濃(nong)度為10μM。
9. 將培(pei)養皿/板/瓶置于37℃培(pei)養箱中(zhong)，每天更換(huan)培(pei)養基(ji)（換(huan)液不需要(yao)再添加Y27632，但培(pei)養基(ji)需提前預熱）。
2.3.凍存
當集落變得(de)較大、中心(xin)變得(de)密集、明亮（對比邊緣），相(xiang)鄰的集落開始融合時，此時可進行傳代(dai)。
1. 傳代前(qian)， 準(zhun)備 37 ℃預(yu)熱好的好無鈣鎂 PBS 溶液及消化液，完(wan)全培(pei)養(yang)基。
2. 吸走上清，并加(jia)入 37℃預熱好的 PBS 溶液(ye)清洗1次。
3. 加(jia)入適量(liang)（按 6 孔(kong)板每孔(kong)加(jia) 1ml，6cm 皿(min)加(jia) 2ml，10cm 皿(min)加(jia) 3ml 的(de)量(liang)）的(de) 37℃預熱好的(de)消化液。
4. 37℃放(fang)置1-2min，用(yong)手指輕(qing)彈皿(min)/板/瓶身，顯微鏡下觀(guan)察到大(da)部分克隆(long)邊緣開始(shi)脫離(li)培養皿(min)/板底，克隆(long)內部大(da)部分細胞(bao)成團脫落(luo)。
5. 加入(ru)適量(liang)的完全培養基終止消化。
6. 移入(ru)離(li)心管，300g離(li)心5min。
7. 離(li)心后重(zhong)懸(xuan)（重(zhong)懸(xuan)步驟參照復蘇4-5步）。
8. 使用預冷的(de)凍(dong)(dong)(dong)存液輕(qing)輕(qing)的(de)重懸(xuan)細胞團，然后將細胞懸(xuan)液轉移至凍(dong)(dong)(dong)存管，凍(dong)(dong)(dong)存按 6 孔板(ban)每孔凍(dong)(dong)(dong) 1 支(zhi)，6cm 皿凍(dong)(dong)(dong) 2-4 支(zhi)，10cm 皿凍(dong)(dong)(dong) 6-12 支(zhi)（凍(dong)(dong)(dong)存液為：90%H9細胞完全培養基與 10%的(de)DMSO。
1.收到細胞后，若(ruo)發現(xian)干冰已揮(hui)發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破(po)損及(ji)細胞有污染(ran)，請立即與我們(men)聯(lian)系。
2.收(shou)到細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)先不(bu)開瓶(ping)蓋，瓶(ping)身擦拭酒(jiu)精后放在培(pei)養(yang)箱(xiang)靜置2-4小時（視細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)密(mi)度而定）穩(wen)定細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)狀(zhuang)態(tai)。接著在倒置顯(xian)(xian)微(wei)(wei)鏡下觀察細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)生長(chang)情(qing)況，并對細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)進行不(bu)同倍數拍照（建議收(shou)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)時就整體(ti)外(wai)觀拍一(yi)張照片，觀察培(pei)養(yang)基的顏色和(he)是否有漏液情(qing)況，隨后在顯(xian)(xian)微(wei)(wei)鏡下拍下細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)狀(zhuang)態(tai)，100*，200*各(ge)一(yi)張），觀察記錄細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)在運(yun)輸過程中是否有污染(ran)情(qing)況。作為(wei)我方進行銷售依據。
3.由于(yu)細(xi)胞(bao)狀態受環境(jing)、操作和運輸等(deng)多(duo)方(fang)面因素影響，故(gu)本(ben)公司只保(bao)證客(ke)戶(hu)收到細(xi)胞(bao)后一周內(nei)的(de)(de)細(xi)胞(bao)狀態，故(gu)客(ke)戶(hu)需要售后時(shi)需出示(shi)收到細(xi)胞(bao)的(de)(de)時(shi)間證明(ming)(ming)及(ji)客(ke)戶(hu)提供收貨時(shi)間和發現問題后客(ke)服人(ren)員(yuan)溝通的(de)(de)時(shi)間證明(ming)(ming)，期間間隔(ge)時(shi)間不能大于(yu)7天。
4.所(suo)有(you)動(dong)物細(xi)胞均視為有(you)潛在(zai)的(de)生(sheng)物危(wei)害(hai)性(xing)，必(bi)須(xu)在(zai)二(er)級生(sheng)物安(an)全臺內操作，并請注意防護，所(suo)有(you)廢液及接觸過此細(xi)胞的(de)器皿需要(yao)滅菌后方(fang)能丟棄。
