細胞名稱：H1

細(xi)胞描述：人胚胎干細(xi)胞，曾用名(ming)WA01

形 態：球形克隆，貼壁生長

來源性(xing)別：男(nan)性

組織：內細胞團

凍存日期/代(dai)數：詳(xiang)見 凍存管/培養瓶 標識

建議復蘇培養(yang)體系(xi)：1 個 T25 培(pei)養瓶或6cm培(pei)養皿

細(xi)胞(bao)狀態(tai)：良(liang)好

支原體檢(jian)測(ce)結(jie)果：陰性

細胞用途(tu)：僅(jin)供科研(yan)使用。

STR鑒定結果：

H1細胞完全培養基(ji)培養人胚胎(tai)干(gan)細胞

1.試(shi)劑和材料

H1細(xi)胞完全培養基試劑盒

所需(xu)的(de)其它試劑和材(cai)料

2.培(pei)養流程

2.1.復蘇(su)

在開始復蘇(su)前(qian)，將所有試管(guan)、預熱后的(de)培養基和培養皿準備好，已確保盡快完成(cheng)復蘇(su)過程。

1. 將凍存(cun)管從(cong)液氮中取出，快速(su)在37℃水(shui)浴槽(cao)中解凍，輕柔持(chi)續地(di)搖(yao)動(dong)凍存(cun)管，直到(dao)只剩下一個小冷凍團(tuan)。從(cong)水(shui)浴槽(cao)取出凍存(cun)管，70%乙醇擦(ca)拭進行消毒。

2. 使用移(yi)液(ye)管(guan)將凍存管(guan)中(zhong)(zhong)含有H1細(xi)胞(bao)的凍存液(ye)輕輕轉移(yi)至一個含有5-6mL已經預熱的完全培養基的15mL離心(xin)管(guan)中(zhong)(zhong)，過程必須(xu)輕柔防止吹散細(xi)胞(bao)團(tuan)。

3. 室溫300g離心5min。

4. 吸出培養基，確保細胞團完整。

5. 然后緩慢加(jia)入1mL完全培養基，用手(shou)指輕彈離(li)心(xin)管底(di)部，使細胞團脫離(li)底(di)部并(bing)分(fen)散。

6. 輕輕的將此1mL細胞(bao)懸液轉(zhuan)移至已包被的培養(yang)(yang)皿/板/瓶，根據最終培養(yang)(yang)細胞(bao)的液體體積，加入ROCK inhibitor Y27632，終濃度(du)為10μM。

7. 將培(pei)養皿/板/瓶置(zhi)于37℃培(pei)養箱中，每天(tian)更換(huan)(huan)培(pei)養基(ji)（換(huan)(huan)液不需(xu)要再添(tian)加Y27632，但培(pei)養基(ji)需(xu)提前預熱）。

2.2.傳代

當(dang)集(ji)(ji)落變得(de)(de)較大、中心(xin)變得(de)(de)密(mi)集(ji)(ji)、明亮（對比邊緣），相鄰的(de)集(ji)(ji)落開始融合(he)時，此時可進(jin)行傳代。

1. 傳(chuan)代前， 準備(bei) 37 ℃預(yu)熱好的好無鈣鎂 PBS 溶液及消化液，完全培(pei)養基。

2. 吸(xi)走上(shang)清(qing)，并加(jia)入 37℃預熱好的 PBS 溶液清(qing)洗1次。

3. 加(jia)入適量(liang)（按 6 孔板(ban)每孔加(jia) 1ml，6cm 皿加(jia) 2ml，10cm 皿加(jia) 3ml 的(de)量(liang)）的(de) 37℃預熱好的(de)消化液。

4. 37℃放置(zhi)1-2min，用手指輕彈皿/板(ban)(ban)/瓶(ping)身，顯微(wei)鏡(jing)下觀察到(dao)大部分克隆(long)(long)邊緣開始(shi)脫(tuo)離培養皿/板(ban)(ban)底，克隆(long)(long)內部大部分細胞成(cheng)團(tuan)脫(tuo)落(luo)。

5. 加入適量的完全(quan)培養基(ji)終(zhong)止消(xiao)化。

6. 移入離(li)心(xin)管，300g離(li)心(xin)5min，

7. 離心后(hou)重懸（重懸步驟(zou)參照復(fu)蘇4-5步）。

8. 傳(chuan)代比例(li)為 1：6—1：8，根據最(zui)終(zhong)培養細胞(bao)的液體體積，加入ROCK inhibitor Y27632，終(zhong)濃度為10μM。

9. 將培養(yang)皿/板/瓶置于37℃培養(yang)箱中，每天更換培養(yang)基(ji)（換液不(bu)需要(yao)再(zai)添(tian)加Y27632，但培養(yang)基(ji)需提前預熱）。

2.3.凍存

當集落變得(de)較大、中心變得(de)密集、明亮(liang)（對(dui)比邊緣），相鄰的集落開始融(rong)合(he)時(shi)，此(ci)時(shi)可進行傳代。

1. 傳代前， 準備 37 ℃預熱好(hao)的好(hao)無鈣鎂 PBS 溶液及消化液，完全(quan)培養基。

2. 吸(xi)走(zou)上清，并加入(ru) 37℃預熱好(hao)的(de) PBS 溶液清洗(xi)1次。

3. 加入(ru)適(shi)量(liang)（按 6 孔板每孔加 1ml，6cm 皿加 2ml，10cm 皿加 3ml 的量(liang)）的 37℃預熱好的消(xiao)化液。

4. 37℃放置(zhi)1-2min，用(yong)手指輕(qing)彈皿/板(ban)/瓶身(shen)，顯微鏡下觀察到(dao)大部(bu)分(fen)克隆邊緣開始脫離培養皿/板(ban)底，克隆內(nei)部(bu)大部(bu)分(fen)細胞成團脫落(luo)。

5. 加入適量(liang)的(de)完全培(pei)養(yang)基終止消(xiao)化。

6. 移入離心(xin)管，300g離心(xin)5min。

7. 離(li)心后重懸（重懸步驟參照(zhao)復(fu)蘇4-5步）。

8. 使(shi)用(yong)預冷的凍(dong)存液輕輕的重懸細胞團，然后將細胞懸液轉移至凍(dong)存管，凍(dong)存按 6 孔(kong)板每孔(kong)凍(dong) 1 支(zhi)，6cm 皿凍(dong) 2-4 支(zhi)，10cm 皿凍(dong) 6-12 支(zhi)（凍(dong)存液為：90%H9細胞完全培養基與 10%的DMSO。