JM110 Chemically Competent Cell 產品說明書

產品規格（CAT#: DL1025）

JM110：                                                     100μl/支(zhi)

pUC19 (control vector，10pg/μl):       ;            10μl

保存條件(保質期)：                            -80℃（6個月） 

基因型

rpsL (Str^R) thr leu thi-1 lacY galK galT ara tonA tsx dam dcm supE44 Δ(lac-proAB) /F′ [traD36 proAB lacI^qlacZΔM15] 

產品說明

JM110菌株具有硫酸鏈霉素抗性(Str^R)；是甲基化基因dam、dcm缺失的菌株，提取得到的質粒DNA，可被對dam、dcm甲基化敏感的內切酶切割；lacI^qlacZΔM15的存在使JM110可以進行藍白斑篩選，但轉化效率不高，一般不用于質粒構建，只適用于質粒轉化。JM110感受態細胞經特殊工藝制作，pUC19 質粒檢測轉化效率約10⁷ cfu/μg DNA。

操作(zuo)方法

1. JM110感受態(tai)細胞(bao)從-80℃拿出，迅(xun)速插入冰中，5分鐘(zhong)(zhong)后待菌塊融化，加入目的DNA（質粒或(huo)連(lian)接產物）并用手撥(bo)打EP管底輕輕混勻(yun)(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘(zhong)(zhong)。

2. 42℃水(shui)浴熱激45秒，迅速放回(hui)冰中并(bing)靜置2分鐘，晃動會(hui)降低轉化效率。

3.向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基(ji) (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離(li)心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布(bu)到含相(xiang)應抗(kang)生素的(de)2YT或LB培養基(ji)上。

5.將(jiang)平(ping)板(ban)倒置放于37℃培養(yang)箱過夜培養(yang)。

注意(yi)事項

1. 感(gan)受態細胞(bao)最好在冰(bing)中(zhong)(zhong)緩慢融化，插入(ru)冰(bing)中(zhong)(zhong)8分鐘內加(jia)入(ru)目標(biao)DNA，不可(ke)在冰(bing)中(zhong)(zhong)放(fang)(fang)置時間過(guo)長，長時間存(cun)放(fang)(fang)會(hui)降低轉化效(xiao)率。

2. 混入質粒時(shi)應(ying)輕柔操作。

3. 轉化高(gao)濃(nong)度的(de)質粒可相應(ying)減少最終(zhong)用于(yu)涂板的(de)菌量。